[14.09월]박준원교수 연구실-Reading Single DNA with DNA Polymerase Followed by Atomic Force Microscopy
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작성자 최고관리자 댓글 조회 작성일 14-09-18 18:25본문
Reading Single DNA with DNA Polymerase Followed by Atomic Force Microscopy
Youngkyu Kim, Eung-Sam Kim, Yoonhee Lee, Joung-Hun Kim, Bong Chu Shim, Seong Moon Cho, Jeong Soo Lee, and Joon Won Park*
The importance of DNA sequencing in the life sciences and personalized medicine is continually increasing. Single-molecule sequencing methods have been developed to analyze DNA directly without the need for amplification. Here, we present a new approach to sequencing single DNA molecules using atomic force microscopy (AFM). In our approach, four surface-conjugated nucleotides were examined sequentially with a DNA polymerase-immobilized AFM tip. By observing the specific rupture events upon examination of a matching nucleotide, we could determine the template base bound in the polymerase’s active site. The subsequent incorporation of the complementary base in solution enabled the next base to be read. Additionally, we observed that the DNA polymerase could incorporate the surface-conjugated dGTP when the applied force was controlled by employing the force-clamp mode.
DNA 염기서열 분석의 중요성이 증가함에 따라 표적 DNA의 증폭 없이 염기 서열을 분석할 수 있는 기술들이 개발되고 있다. 본 연구진은 원자힘 현미경(AFM)을 이용한 새로운 단일 분자 DNA 시퀀싱 방법을 제시하였다. DNA 중합효소가 고정된 탐침으로 네 개의 염기가 고정된 표면을 검사하고 상보적인 염기가 고정된 표면에서 특이적인 결합력을 관찰함으로써, 빛이나 전기 신호가 아닌 결합력을 기반으로 한 시퀀싱 방법을 최초로 보고하였다. 한편 중합효소에 가해지는 물리적인 힘이 상보적인 염기를 편입시키는 것을 저해할 수 있음을 밝혔다.
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